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更新时间：2021-01-27
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养殖场用非洲猪瘟检测试剂盒也可用于环境检测非洲猪瘟试剂盒由风途科技为您供应。养殖场用非洲猪瘟检测试剂盒也可用于环境检测非洲猪瘟试剂盒均已经获得农业农村产品批准，可以满足非洲猪瘟核酸现场快速检测需求。可定量快速畜牧类疾病诊断如非洲猪瘟、、猪瘟、猪蓝耳、伪狂犬等疾病，广泛应用于养殖场、屠宰场、食品加工厂、肉产品深加工企业、农业农村、畜牧、检验检疫单位使用。
【产品名称】
通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）
英文名称：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）
［预期用途］
本试剂盒主要用于检测疑似感染猪抗凝血及临床病料中的非洲猪瘟病毒（ASFV, African Swine Fever
Virus）核酸，适用于非洲猪瘟病毒的检测、辅助诊断和流行病学调查。
【试剂盒组分】
1、试剂盒组成及贮藏条件
名称 | 50 T | 贮藏条件 |
1、反应液A | ImL | -20°C |
2、反应液B | ImL | |
3、阳性对照 | 250μL | |
4、阴性对照 | 250μL | |
5、PCR反应液 | 850μL | |
6、酶混合液 | 150μL |
2、需自备材料：生理盐水、无菌枪头、荧光PCR反应管、记号笔等。
【操作步骤】
一、样品制备
1、 血液样品：采集抗凝血（抗凝剂为EDTA）或血清样品，编号备用。
2、 组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品或软蜱0.1g（黄豆粒大小），眼科剪剪碎于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，再加1mL生理盐水混匀，4°C条件下8000 rpm/分钟离心2分钟，取上清液于灭菌离心管中，编号备用。
二、DNA提取
取反应液A 20μL分别加入到新的1.5mL离心管，加入抗凝而或血清或组织上清液2μL混匀，室温（20°C左右）静置3分钟，加入反应液B 20μL,吹打混匀即可，若为抗凝全血，则需8000rpm/分钟再离心2分钟后做为待检DNA溶液。
二、PCR扩增
1、配液：取出PCR反应液、酶混合液，在室温*融化后，充分混匀，瞬离，可将酶混合液全取岀直接加入到PCR反应液中，充分混匀，瞬离后按每份20μL分装使用；或按照每份PCR反应液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的试验用量，混合两种反应液,瞬离后按照每份20μL分装到荧光PCR 反应管中，剩余试剂立即冻存；（操作过程要注意避光）
2、加样扩增：分别向上述PCR反应管中加入5μL样本 DNA或阴性对照或阳性对照，混匀并瞬离, 放入荧光PCR仪上运行以下程序：
步骤 | 条件 | 循环数 |
UNG处理 | 50°C： 2分钟 | 1 |
预变性 | 95°C： 3分钟 | 1 |
预扩増 | 95°C： 8 秒 55C： 8 秒 | 5 |
PCR扩增 | 95°C： 8 秒 55°C： 8 秒 | 40 |
荧光通道选择FAM,在40循环阶段每个循坏的55°C时收集荧光信号。设置扩增体系为25μL,同时要选择 passive reference 和 quencher 为 none 的模式。
(注:若荧光PCR仪(如ABI7500)按说明书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行,可将预扩增和PCR扩增条件变更为95°C： 5秒 55°C：30秒。)
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